Real -Time PCR即實時監(jian)測(ce)PCR擴增產物并進行解析的(de)方法(fa)，它是在PCR反(fan)應(ying)(ying)體(ti)系中(zhong)加入熒(ying)光物質，并通(tong)過Real -Time PCR檢測(ce)系統對PCR反(fan)應(ying)(ying)進程中(zhong)的(de)熒(ying)光信號(hao)強度(du)進行實時監(jian)測(ce)，最(zui)終對實驗(yan)數據進行分析處理(li)的(de)方法(fa)。Real -Time PCR自1996年由(you)美國(guo)Applied Biosystems公司推出以(yi)來，廣泛應(ying)(ying)用于生(sheng)物研究的(de)各個領(ling)域。目前主要有SYBR Green 染(ran)料、Taqman探針(zhen)法(fa)兩種。

PCR技術服務主要儀器及耗材：

旋渦振蕩器 ：上海(hai)青浦瀘西儀器廠產(chan)品

手(shou)握式電動勻漿(jiang)機：德國FLUKO公司產品

低溫冷(leng)凍(dong)離心機：Sigma（3K15）公司產(chan)品

Real-time檢測儀：ABI（ABI-7300）公司產品(pin)

超純(chun)水分離系(xi)統：美國(guo)LABCONCO公(gong)司

離心管(guan)及10μL、200μL、1000μL槍頭等常規耗材均為國產；RNA提取過程中所(suo)需(xu)的離心管(guan)、槍頭等耗材經過0.1%的DEPC水浸泡過一夜，121℃滅菌30min，烘(hong)干后備用。

PCR技術服務實驗室試劑的操作：

1)所用的(de)所有溶液都應該沒有核酸和(he)(或)核酸酶(DNase和(he)RNase)污(wu)染。

2)所有PCR試(shi)劑中(zhong)使用的(de)水都(dou)應該(gai)是高質量(liang)的(de)-新(xin)鮮蒸餾的(de)去離子(zi)水，用0.22μm過濾的(de)，并且是高壓滅菌。

3)在(zai)20℃到25℃貯存(cun)的試(shi)(shi)劑(ji)建議加點像疊氮鈉一類的抗微(wei)生物(wu)劑(ji)，在(zai)擴增(zeng)試(shi)(shi)劑(ji)或(huo)樣(yang)品制(zhi)備(bei)試(shi)(shi)劑(ji)中加入0.025%的疊氮鈉不(bu)抑制(zhi)擴增(zeng)反應。

4)所用試劑都(dou)應該以大(da)體積配(pei)制，實驗一下看試劑是否滿意，然后分裝(zhuang)成僅(jin)夠一次使用的(de)量進行貯(zhu)存。

5)所有試劑(ji)和樣(yang)品準備過(guo)程中(zhong)都要(yao)使用一次性滅菌的瓶(ping)子和管(guan)子。

6)新配制的(de)試劑在用于準備新的(de)標本(ben)之前應該(gai)加以檢驗。

7)樣品準備和(he)前PCR區所使(shi)用的移液管在不使(shi)用時都應該小心保存。

本程序適用于自動PCR操作，可適用于大多數情況，所用酶是不含核酸外切酶活性的熱穩定聚合酶，如Taq聚合酶等。
引物（各50pmol） 0.2mmol/L dNTPs（必須使用高質量的dNTPs，這一點非常重要。dNTPs經反復化凍后會發生降解，因此應分成小份保存。應注意混合物中四種dNTP的量要相等。

所有產品(pin)僅(jin)供科研使用(yong)，不(bu)得用(yong)于食(shi)用(yong)，醫(yi)療等(deng)其(qi)它用(yong)途(tu)。