IP類實驗代測的介紹

免(mian)疫(yi)共沉淀(Co-IP 蛋白與蛋白)

免疫(yi)共沉淀(dian)（Co-Immunoprecipitation）是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎的用于研究蛋白質相互作用的經典方法。是確定兩種蛋白質在完整細胞內生理性相互作用的有效方法。 當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內存在的許多蛋白質－蛋白質間的相互作用被保留了下來。當用預先固化在agarose beads上的蛋白質A的抗體免疫沉淀A蛋白，那么與A蛋白在體內結合的蛋白質B也能一起沉淀下來。再通過蛋白變性分離，對B蛋白進行檢測，進而證明兩者間的相互作用。 這種方法得到的目的蛋白是在細胞內與興趣蛋白天然結合的，符合體內實際情況，得到的結果可信度高。這種方法常用于測定兩種目標蛋白質是否在體內結合；也可用于確定一種特定蛋白質的新的作用搭檔。

CHIP實驗（DNA-蛋白(bai)相互作用）
染色質免疫(yi)沉淀技術(shu)的(de)原(yuan)理是：在生理狀(zhuang)態(tai)下(xia)把細胞內的(de)DNA與蛋白質交聯在一起，通過超聲或酶處理將染色質切為小片段后，利用抗原抗體的特異性識別反應，將與目的蛋白相結合的DNA片段沉淀下來。染色質免疫沉淀技術一般包括細胞固定，染色質斷裂，染色質免疫沉淀，交聯反應的逆轉，DNA的純化，以及DNA的鑒定。因為ChIP實驗涉及的步驟多，結果的重復性較低，所以對ChIP實驗過程的每一步都應設計相應的對照，而且對結果的分析也需要有一定的經驗。對于剛剛開始使用ChIP技術的研究人員來說，使用成熟的商品化試劑盒和相關的技術服務會達到事半功倍的效果。

Clip實驗（RNA-蛋白相(xiang)互作用）
核(he)小體組蛋白可(ke)以(yi)發生多種翻(fan)譯(yi)后的共價修飾，如(ru)乙酰化(hua)、甲基化(hua)、磷酸化(hua)、泛素化(hua)等，這些共價修飾與(yu)真核(he)基因(yin)的表達密(mi)切相關。根據“組(zu)蛋(dan)白(bai)密碼"假說，組(zu)蛋(dan)白(bai)的各種共價修飾的組(zu)合會以協同(tong)或拮抗的方式(shi)誘導(dao)特異(yi)的下游生物學(xue)功能，因(yin)此，ChIP也為研究(jiu)組(zu)蛋(dan)白(bai)修飾在(zai)基因(yin)表(biao)達(da)中的作用，全面闡明(ming)真(zhen)核(he)基因(yin)的表(biao)達(da)調控機制提供了強(qiang)有力的研究(jiu)工(gong)具。
該技術主要應用于：
1.組蛋白修飾酶的(de)抗(kang)體作(zuo)為“生物標記"
2.轉錄調控分析
3.藥物開發研究
4.有絲分裂(lie)研(yan)究(jiu)
5.DNA損(sun)失與凋亡分析

RIP技術(shu)（RNA結合蛋白免(mian)疫沉淀）
RIP這種新興的(de)(de)技術運用(yong)針對目標蛋(dan)白的(de)(de)抗(kang)(kang)體把相應(ying)的(de)(de)RNA-蛋(dan)白復(fu)合(he)(he)(he)物(wu)(wu)沉(chen)淀下來，然后(hou)經過分離純(chun)化(hua)就可以(yi)對結合(he)(he)(he)在(zai)復(fu)合(he)(he)(he)物(wu)(wu)上的(de)(de)RNA進(jin)行分析。RIP可以(yi)看成是普(pu)遍使(shi)用(yong)的(de)(de)染色質免疫沉(chen)淀ChIP技術的(de)(de)類似(si)應(ying)用(yong)，但由于研究(jiu)對象是RNA-蛋(dan)白復(fu)合(he)(he)(he)物(wu)(wu)而(er)不是DNA-蛋(dan)白復(fu)合(he)(he)(he)物(wu)(wu)，RIP實(shi)驗的(de)(de)優化(hua)條(tiao)件與ChIP實(shi)驗不太相同(tong)（如復(fu)合(he)(he)(he)物(wu)(wu)不需(xu)要固定，RIP反應(ying)體系中的(de)(de)試劑和抗(kang)(kang)體絕對不能(neng)含有RNA酶，抗(kang)(kang)體需(xu)經RIP實(shi)驗驗證等等）。RIP技術下游結合(he)(he)(he)microarray技術被稱為RIP-Chip，幫助我(wo)們(men)更高通量(liang)地了解癌癥(zheng)以(yi)及其它疾病(bing)整(zheng)體水(shui)平(ping)的(de)(de)RNA變化(hua)。
RIP 實驗基(ji)本原理： 1. 用抗體或(huo)表位(wei)標記物捕獲細(xi)胞核內或(huo)細(xi)胞質中內源性的(de)(de)(de)RNA結合(he)(he)(he)蛋(dan)白。 2. 防止非(fei)特異性的(de)(de)(de)RNA的(de)(de)(de)結合(he)(he)(he)。 3. 免疫(yi)沉淀把RNA結合(he)(he)(he)蛋(dan)白及其結合(he)(he)(he)的(de)(de)(de)RNA一起分(fen)離(li)出來(lai)。 4.結合(he)(he)(he)的(de)(de)(de)RNA序列通(tong)過microarray（RIP-Chip），定(ding)量RT-PCR或(huo)高通(tong)量測序（RIP-Seq）方(fang)法(fa)來(lai)鑒定(ding)。 延伸閱讀(du)：95%的(de)(de)(de)人類基(ji)因組并不(bu)編(bian)碼(ma)基(ji)因，而(er)是產生(sheng)大量的(de)(de)(de)非(fei)編(bian)碼(ma)RNA,真正(zheng)編(bian)碼(ma)蛋(dan)白質的(de)(de)(de)基(ji)因只占人類總(zong)基(ji)因組的(de)(de)(de)約2%。這些非(fei)編(bian)碼(ma)RNA在生(sheng)命的(de)(de)(de)生(sheng)長發育(yu)的(de)(de)(de)各個(ge)階(jie)段都發揮著重要(yao)的(de)(de)(de)調節作(zuo)用，與(yu)(yu)艾滋(zi)病(bing)(bing)(bing)、白血病(bing)(bing)(bing)、糖尿(niao)病(bing)(bing)(bing)、畸形等多種病(bing)(bing)(bing)變(bian)密切相關，并且(qie)參(can)與(yu)(yu)著干細(xi)胞和表觀(guan)遺(yi)傳學調控。

MeRIP-PCR（m6A RNA甲基(ji)化）
MeRIP-Seq (methylated RNA immunoprecipitation sequencing)結合RNA-蛋白(bai)免疫共沉淀和(he)高(gao)通量測序技術，可(ke)實現全轉錄組(zu)水平上RNA甲基(ji)(ji)(ji)化分(fen)析。由于甲基(ji)(ji)(ji)化修(xiu)(xiu)(xiu)飾約占(zhan)所有(you)RNA修(xiu)(xiu)(xiu)飾的(de)60% 以上，而N6-甲基(ji)(ji)(ji)腺嘌呤(ling)（N6-methyladenosine，m6A），作為最常見的(de)一種(zhong)轉錄后修(xiu)(xiu)(xiu)飾，介導了超過80%的(de)RNA甲基(ji)(ji)(ji)化。基(ji)(ji)(ji)于MeRIP-Seq分(fen)析RNA甲基(ji)(ji)(ji)化模式(shi)，加速(su)了癌癥發(fa)生和(he)轉移、胚胎發(fa)育、脂類代(dai)謝、環狀RNA翻譯和(he)DNA損傷修(xiu)(xiu)(xiu)復等生物(wu)學功能和(he)作用機制的(de)研(yan)究。

服(fu)務類型(xing)如下(xia)：
免疫共沉淀(Co-IP 蛋白與蛋白)
CHIP實驗（DNA-蛋白相互作(zuo)用）
RIP技術（RNA結合蛋白免疫(yi)沉淀）
Clip實驗（RNA-蛋白(bai)相互(hu)作(zuo)用）
MeRIP-PCR（m6A RNA甲基化）

IP類實驗代測的介紹