常規病理染色實驗代測的樣本包埋與固定

HE染色實驗

HE染色法，即是(shi)蘇木精-伊紅(hong)染(ran)(ran)色(se)(se)法(fa)。石蠟切片(pian)技術里常用的(de)染(ran)(ran)色(se)(se)法(fa)之一(yi) 。蘇木精染(ran)(ran)液為(wei)(wei)堿性(xing)，主要(yao)使(shi)細(xi)(xi)胞核內的(de)染(ran)(ran)色(se)(se)質(zhi)(zhi)與胞質(zhi)(zhi)內的(de)核糖體著(zhu)(zhu)紫藍色(se)(se)；伊紅(hong)為(wei)(wei)酸性(xing)染(ran)(ran)料，主要(yao)使(shi)細(xi)(xi)胞質(zhi)(zhi)和(he)細(xi)(xi)胞外基(ji)質(zhi)(zhi)中的(de)成分著(zhu)(zhu)紅(hong)色(se)(se)。易(yi)于(yu)被堿性(xing)或酸性(xing)染(ran)(ran)料著(zhu)(zhu)色(se)(se)的(de)性(xing)質(zhi)(zhi)分別(bie)稱為(wei)(wei)嗜堿性(xing)和(he)嗜酸性(xing)；若于(yu)兩(liang)種染(ran)(ran)料的(de)親(qin)和(he)力都不強(qiang)，則呈中性(xing)。一(yi)般(ban)的(de)組織變(bian)化(hua)和(he)組織產(chan)物都可以通過(guo)這一(yi)染(ran)(ran)色(se)(se)法(fa)顯示出來。是(shi)形態學的(de)染(ran)(ran)色(se)(se)方法(fa)。

染(ran)色(se)結(jie)果：細胞核被蘇木精染成鮮明(ming)的藍色(se)(se)(se)(se)，軟骨基質、鈣(gai)鹽顆(ke)粒(li)呈(cheng)深藍色(se)(se)(se)(se)，粘液呈(cheng)灰藍色(se)(se)(se)(se)。細胞漿被伊(yi)紅(hong)染成深淺不同(tong)的粉紅(hong)色(se)(se)(se)(se)至桃(tao)紅(hong)色(se)(se)(se)(se)，胞漿內(nei)嗜酸性(xing)顆(ke)粒(li)呈(cheng)反光強的鮮紅(hong)色(se)(se)(se)(se)。膠原纖維(wei)呈(cheng)淡粉紅(hong)色(se)(se)(se)(se)，彈力纖維(wei)呈(cheng)亮粉紅(hong)色(se)(se)(se)(se)，紅(hong)血球呈(cheng)橘(ju)紅(hong)色(se)(se)(se)(se)，蛋白(bai)性(xing)液體呈(cheng)粉紅(hong)色(se)(se)(se)(se)。

樣本包埋與固定

（1）固定：根據需要取材后置于福爾(er)馬林中固定48小時后；

（2）洗滌與脫(tuo)水：將(jiang)固定(ding)后的(de)組(zu)織用流水沖洗，去(qu)除殘(can)留的(de)固定(ding)液和(he)雜質(zhi)。不同濃度的(de)乙醇逐級脫(tuo)水，50%、70%、85%、95%直至純(chun)酒精(jing)（無水乙(yi)醇），每級2小時。70%乙(yi)醇中可(ke)長期保(bao)存(cun)；

（3）透明：50%酒精+50%二甲苯中2小時(shi)，純二甲(jia)苯兩(liang)小時(shi)，再一次純二甲(jia)苯兩(liang)小時(shi)；

（4）浸蠟：先(xian)把組織材(cai)料塊放(fang)在熔化的石(shi)蠟和二甲苯(ben)的等(deng)量(liang)混合液浸漬1～2小時(shi)，再先后移入(ru)2個熔化的石蠟液中浸漬(zi)各3小(xiao)時左右；

（5）包埋：將(jiang)(jiang)浸好蠟(la)的組織(zhi)塊(kuai)放入裝有蠟(la)液的容器中，擺好組織(zhi)塊(kuai)位(wei)置。待石蠟(la)凝固后將(jiang)(jiang)周圍多余的石蠟(la)去除(chu)，準(zhun)備(bei)切片(pian)；

（6）切(qie)片(pian)：將切(qie)片(pian)刀裝在刀片(pian)機的刀架上(shang)并固定(ding)緊，固定(ding)蠟塊底座或蠟塊，調整蠟塊與(yu)刀至合適位置，刀刃與(yu)蠟塊表(biao)面呈5度(du)(du)角(jiao)。調整切(qie)片機上的切(qie)片厚度(du)(du)為4-7μm，然后切片。

HE染色

（1） 脫蠟：60℃、30min；二甲苯I 10min、二甲苯II 10min ；

（2）水化：將脫蠟后的(de)切片(pian)經100%酒精、95%酒精、85%酒(jiu)精、75%酒精、雙蒸水各3min ；

（3）將已入蒸餾(liu)水后的切片(pian)放入蘇木精(jing)水溶液中染色數分鐘，流水沖洗(xi)；

（4）1%鹽(yan)酸酒精(jing)分化(hua)0.5-1min；

（5）流水沖洗1小(xiao)時后入蒸餾水片刻；

（6）碳-酸-鋰飽和水溶液反(fan)藍1min后(hou)流(liu)水沖洗；

（7）入70％和90％酒精中脫(tuo)水各(ge)10min；

（8）入酒精(jing)伊紅(hong)染色液染色2-3min；。

（9）脫水(shui)透明：染色后的切片經純(chun)酒精脫水(shui)，再經二甲苯(ben)使切片透明；

（10）封片(pian)(pian)(pian)：將(jiang)已(yi)透明的切片(pian)(pian)(pian)滴上中(zhong)性樹(shu)(shu)膠(jiao)(jiao)，蓋(gai)上蓋(gai)玻(bo)片(pian)(pian)(pian)封固。待樹(shu)(shu)膠(jiao)(jiao)略干后，貼上標(biao)箋，切片(pian)(pian)(pian)標(biao)本就可(ke)使用；

圖(tu)像采集

通過掃描，采集圖(tu)片。

Masson染色代測

Masson染(ran)色(se)是用(yong)(yong)(yong)于顯示組(zu)織(zhi)中(zhong)纖(xian)(xian)維(wei)的(de)染(ran)色(se)方(fang)法之(zhi)一(yi)，用(yong)(yong)(yong)于膠原纖(xian)(xian)維(wei)染(ran)色(se)而(er)經(jing)典(dian)的(de)技術方(fang)法。一(yi)般(ban)是用(yong)(yong)(yong)兩種或(huo)三種陰(yin)離子染(ran)料混合，膠原纖(xian)(xian)維(wei)呈藍(lan)色(se)，肌纖(xian)(xian)維(wei)，胞質，纖(xian)(xian)維(wei)素 角蛋(dan)白紅(hong)細(xi)胞呈紅(hong)色(se)，細(xi)胞胞核呈藍(lan)褐(he)色(se)。用(yong)(yong)(yong)來顯示組(zu)織(zhi)中(zhong)纖(xian)(xian)維(wei)以(yi)及炎(yan)性因(yin)子的(de)染(ran)色(se)方(fang)法之(zhi)一(yi)。

常規病理染色實驗代測的樣本包埋與固定