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免疫組化切片注意事項

發布時間: 2017-01-17  點擊次數: 2878次

   切片(pian)組織得(de)(de)到(dao)很(hen)好處(chu)(chu)(chu)理后在進(jin)行(xing)切片(pian)之前(qian)還(huan)應對(dui)玻璃片(pian)進(jin)行(xing)處(chu)(chu)(chu)理,由于我們檢(jian)測抗(kang)原(yuan)是多(duo)種(zhong)(zhong)多(duo)樣的,因(yin)染色操作(zuo)程序(xu)復雜,時間較長,有些抗(kang)原(yuan)是要進(jin)行(xing)各種(zhong)(zhong)抗(kang)原(yuan)修復處(chu)(chu)(chu)理,如(ru)微(wei)波、高壓、水溶酶等,玻片(pian)如(ru)果得(de)(de)不到(dao)很(hen)好的處(chu)(chu)(chu)理,將易(yi)造成脫片(pian),為保證免疫組化實驗的正常進(jin)行(xing),要求在貼片(pian)前(qian)對(dui)載玻片(pian)作(zuo)適當處(chu)(chu)(chu)理,必須在清洗干凈的玻片(pian)上進(jin)行(xing)粘合(he)劑的處(chu)(chu)(chu)理以防脫片(pian)。
1)Poly-L-Lysine 
一(yi)般采用(yong)(yong)分子(zi)量30000左右的(de)(de)0.5%多聚賴氨酸,也可用(yong)(yong)試劑公(gong)司(si)出(chu)售的(de)(de)其(qi)濃(nong)溶液(ye)以1:10去離子(zi)水稀釋。方(fang)(fang)法是將玻片浸泡其(qi)中(zhong),傾盡余液(ye),在60℃溫(wen)箱中(zhong)烤干備用(yong)(yong),此方(fang)(fang)法的(de)(de)優(you)點是可以用(yong)(yong)于(yu)多種組織化(hua)學、免疫組化(hua)及分子(zi)學檢(jian)測中(zhong)的(de)(de)應用(yong)(yong),粘貼效果,但價格稍貴(gui)。
2)明膠硫酸鉻鉀(jia)法(fa)
將(jiang)2.5g明膠(jiao)加(jia)熱溶于500ml蒸(zheng)餾水中,*溶解冷卻(que)后加(jia)入0.25g硫酸鉻鉀攪勻充分溶解即可使用。方法是將(jiang)玻片浸泡其中2 min,取出控盡液(ye)體入溫箱中烤(kao)干備用。此法價格(ge)便宜、方法簡(jian)單,任何實驗都可以使用,特別適用于大(da)批量的(de)使用,但應注意,如果(guo)液(ye)體變藍(lan)或粘(zhan)稠(chou)狀(zhuang)停用。
3)APES (3-氨丙基-乙氧基甲硅烷)
此(ci)法(fa)必須現(xian)(xian)用現(xian)(xian)配。將洗凈玻片(pian)入(ru)1:50丙酮稀釋的APES中(zhong)(zhong)(zhong),浸泡20s,取(qu)出稍(shao)停再(zai)入(ru)丙酮或蒸餾水中(zhong)(zhong)(zhong)刷去末結合的APES晾(liang)干即可(ke)。用此(ci)方法(fa)粘合的玻片(pian)應垂(chui)直烤片(pian)不能(neng)平拷,否(fou)則(ze)組織(zhi)片(pian)中(zhong)(zhong)(zhong)易出現(xian)(xian)氣泡。
  切(qie)(qie)片必須保持切(qie)(qie)片刀(dao)銳利,切(qie)(qie)片要(yao)薄而平整(zheng)、無皺摺、無刀(dao)痕,如有上述問(wen)題的切(qie)(qie)片在進(jin)行免疫組化染色(se)都將出現假陽性現象,切(qie)(qie)片厚度一(yi)般(ban)為3~4μm,切(qie)(qie)好的切(qie)(qie)片在60℃溫(wen)(wen)箱(xiang)中過一(yi)夜,注意烤(kao)片的溫(wen)(wen)度不宜過高(gao),否則易(yi)使(shi)組織(zhi)細胞(bao)結構破壞,而產生抗原標(biao)記定位彌漫現象。

 

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