大鼠芳香酶（ARO）ELISA試劑盒大促！

產品簡介：

芳(fang)香化酶(mei)(aromatase, CYP19)是細胞色(se)素P450酶(mei)系中(zhong)的(de)(de)一(yi)種(zhong), 可(ke)以催化雄烯二酮、睪酮脫去19位碳并使A環芳(fang)構化, 分別形成(cheng)雌(ci)(ci)(ci)二醇(chun)和(he)雌(ci)(ci)(ci)酮, 它(ta)是雌(ci)(ci)(ci)激(ji)(ji)素生物(wu)合(he)成(cheng)的(de)(de)限速酶(mei)。芳(fang)香化酶(mei)是屬于細胞色(se)素P450的(de)(de)一(yi)種(zhong)復合(he)酶(mei)，可(ke)氧化脫去C19類固醇(chun)(雄烯二酮和(he)睪酮)的(de)(de)19-甲基，使A環芳(fang)構化，從(cong)而轉(zhuan)變成(cheng)C18雌(ci)(ci)(ci)激(ji)(ji)素(雌(ci)(ci)(ci)酮和(he)雌(ci)(ci)(ci)二醇(chun))。因此，芳(fang)香化酶(mei)是體內合(he)成(cheng)雌(ci)(ci)(ci)激(ji)(ji)素的(de)(de)重要酶(mei)。

實驗原理：

本(ben)(ben)試劑盒應用(yong)雙(shuang)抗(kang)(kang)體夾心法測(ce)定(ding)標(biao)本(ben)(ben)中(zhong)大(da)(da)鼠(shu)芳(fang)(fang)(fang)香(xiang)(xiang)酶(mei)(mei)(mei)（ARO）水平。用(yong)純化(hua)的大(da)(da)鼠(shu)芳(fang)(fang)(fang)香(xiang)(xiang)酶(mei)(mei)(mei)（ARO）捕獲抗(kang)(kang)體包被微孔板，制成固(gu)相抗(kang)(kang)體，往包被的微孔中(zhong)依次加入大(da)(da)鼠(shu)芳(fang)(fang)(fang)香(xiang)(xiang)酶(mei)(mei)(mei)（ARO），再與HRP標(biao)記(ji)的檢測(ce)抗(kang)(kang)體結(jie)合，形成抗(kang)(kang)體-抗(kang)(kang)原-酶(mei)(mei)(mei)標(biao)抗(kang)(kang)體復(fu)合物，經過*洗滌(di)后(hou)加底物TMB顯色(se)(se)。TMB在(zai)HRP酶(mei)(mei)(mei)的催化(hua)下轉化(hua)成藍色(se)(se)，并在(zai)酸的作用(yong)下轉化(hua)成zui終的黃色(se)(se)。顏色(se)(se)的深淺(qian)和樣品中(zhong)的大(da)(da)鼠(shu)芳(fang)(fang)(fang)香(xiang)(xiang)酶(mei)(mei)(mei)（ARO）呈正相關。用(yong)酶(mei)(mei)(mei)標(biao)儀(yi)在(zai)450nm波長下測(ce)定(ding)吸光度（OD值），通過標(biao)準曲線計算樣品中(zhong)大(da)(da)鼠(shu)芳(fang)(fang)(fang)香(xiang)(xiang)酶(mei)(mei)(mei)（ARO）含(han)量(liang)。

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操作步驟：

1. 標準品的加樣：設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；。
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 加酶：每孔加入酶標試劑100μl，空白孔除外。
4. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。
5. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
6. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
7. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
8. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
9. 測(ce)定(ding)：以空(kong)白孔調零(ling)，450nm波長依序測(ce)量各孔的(de)吸光度(du)（OD值）。 測(ce)定(ding)應在加終(zhong)止液后15分鐘(zhong)以內進行(xing)。

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